把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,倒入玻璃杯中,冷却制成的凝胶。融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。即完成琼脂糖凝胶的配置。
制成的小颗粒用于凝胶过滤,适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤,若使用5%以下浓度的凝胶,也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点,有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。
扩展资料:
琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖,琼脂糖的熔点在62?65°C之间,多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。
琼脂由琼脂糖和琼脂果胶两部分组成:
作为胶凝剂的琼脂糖是不含硫酸酯的非离子型多糖,是形成凝胶的组分,其大分子链链节着1,3苷键交替相连的β-D-半乳糖残基和3,6-内醚-L-半乳糖残基 。而琼脂果胶是非凝胶部分,是带有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的复杂多糖,也是商业提取中力图去掉的部分。
商品琼脂一般带有2%~7%的硫酸酯,0%~3%的丙酮酸醛及1%~3%的甲乙基。在工业上的琼脂 色泽由白到微黄,具有胶质感,无气味或有轻微的特征性气味,琼脂不溶于冷水,易溶于沸水。
琼脂系选用优质天然石花菜、江蓠菜、紫菜等海藻为原料,采用科学方法精炼提纯的天然高分子多糖物质。
琼脂为亲水性胶体,分有条状和粉末状,不溶于冷水,易溶于热水。琼脂在工业上具有独特的重要性,琼脂的浓度即使低至1%仍能形成相当稳定的凝胶,是食品工业、化学工业、医学科研所必需之原料。
百度百科-琼脂糖凝胶
百度百科-琼脂
琼脂糖凝胶电泳是常用的生物化学实验方法,用于分离和分析DNA、RNA或蛋白质等生物大分子。
琼脂糖凝胶电泳的原理是利用凝胶孔径大小的差异来实现生物大分子的分离。琼脂糖是一种多糖类物质,可以在水中形成凝胶状的网络结构,其中孔径的大小与琼脂糖的浓度成反比。当电场施加在凝胶上时,带电的分子会向电场方向迁移,但由于凝胶孔径的限制,分子的迁移速率会与其分子大小成反比,从而实现分离。
琼脂糖凝胶电泳的影响因素包括以下几个方面:
凝胶浓度:凝胶浓度决定了凝胶孔径的大小,一般使用不同浓度的琼脂糖来适应不同大小的目标分子。较低浓度的琼脂糖凝胶适合分离较大的分子,而较高浓度的琼脂糖凝胶适合分离较小的分子。
电场强度:电场强度决定了分子的迁移速率,一般较高的电场强度可以加快迁移速度,但也会增加热量和凝胶溶解的风险。正确选择适当的电场强度可以实现良好的分离效果。
缓冲液pH值:缓冲液的pH值对凝胶电泳的分离效果有影响。一般使用含有缓冲剂的缓冲液来保持适当的pH值,以确保目标分子保持带电状态并稳定分离。
运行时间:运行时间决定了分子在凝胶中迁移的距离,通常根据目标分子的大小和凝胶孔径来确定适当的运行时间。
样品处理:样品的预处理也会影响琼脂糖凝胶电泳的结果。例如,在DNA电泳中,需要进行DNA片段的限制性内切酶切割和核酸染色等处理。
这些因素的合理选择和操作能够使琼脂糖凝胶电泳达到良好的分离效果,并成功分析目标生物大分子。