总离子强度调节缓冲溶剂由维持pH的缓冲剂、盐类、有机物、离子强度调节剂、水等成分组成。
1、维持pH的缓冲剂:一种能够稳定溶液pH值的缓冲剂。常见的缓冲剂有Tris、HEPES、MES等。
2、盐类:盐可以增加溶液的离子强度,常见的盐类有氯化钠、氯化钾、硫酸钠等。
3、有机物:有机物可以减少溶液的离子强度,一般选用聚乙二醇(PEG)、甘油等。
4、离子强度调节剂:可以调节溶液的离子强度,如四氢呋喃(THF)、丙酮等。
5、水:作为溶剂,占据了缓冲液的主体。
1、EDAC和EDC好像是同一个东西,不是差不多。
2、pH=5最好用缓冲溶液来调,MES。
如果不能用缓冲溶液,就先调好,再加,不然调来调去的就分解了。毕竟EDC用量少,对pH影响小。
3、EDC是活化COOH的,所以理论上讲应该是先和COOH组分混合,反应10-15min后再加入NH2组分。如果你的体系简单,可以一起加(A分子含COOH,B分子含NH2),如果是蛋白或者氨基酸的反应,有副反应的,最好先和COOH组分反应。
4、EDC反应的中间产物不稳定,最好用sulfo-NHS活化,经典组合。NHS据说水溶性不好。
5、如果没有sulfo-NHS,文献上也有用NHS在水里面做的,我没做过,不知是否可靠。不过有替代方法,就是COOH在有机溶剂中DCC催化和NHS先反应,纯化后水溶液直接和NH2反应。不需要EDC了。
6、EDC可以配成溶液,也可以粉末直接加,就怕你秤不准。
为了提高 酰胺键的 转化率 EDC 一定要过量,过量到什么程度,好像没有你说的1000:1那么高的,我看过几篇文献里用到EDC的 36:1是最大的,用量少的 1.2:1,但是用量少的一般都是和NHS一起用的,而且是在 ph 5 左右的缓冲溶液里。
如果你的反应物都溶于水,建议用 EDC,NHS in MES buffer ph-5.2~5.5,如果你的反应物有不溶于水的,只能用有机溶剂作为反应介质,建议你只用EDC 试一试,最好不要用DCC,因为副产物真地很难除净,如果实在没办法了,再用DCC,NHS 试试吧。